Wie viel kostet es, eine Ligatur zu transformieren?
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Anonim

Transformation . Fügen Sie zwischen 1-5 µl hinzu Liga Mischung zu kompetenten Zellen für Transformation . Erweitert Liga mit PEG verursacht einen Abfall in Transformation Effizienz (Schnell Ligatur Bausatz). Für große Konstrukte (>10.000 bp) wird die Elektroporation empfohlen.

Wie viel Ligationsprodukt benötige ich davon für die Transformation?

Transformation . Fügen Sie zwischen 1-5 µl hinzu Liga Mischung zu kompetenten Zellen für Transformation . Erweitert Liga mit PEG verursacht einen Abfall in Transformation Effizienz (Schnell Ligatur Bausatz). Für große Konstrukte (>10.000 bp) wird die Elektroporation empfohlen.

Anschließend stellt sich die Frage, was ist Ligation und Transformation? Bei einem typischen Klonierungsexperiment fügen die Forscher zunächst ein DNA-Stück, beispielsweise ein Gen, in ein zirkuläres DNA-Stück ein, das als Plasmid bezeichnet wird. Dieser Schritt verwendet Restriktionsenzyme und DNA-Ligase und wird als a. bezeichnet Liga . Nach einer Liga , besteht der nächste Schritt darin, die DNA in einem Prozess namens. in Bakterien zu übertragen Transformation.

Anschließend kann man sich auch fragen, wie viel DNA für eine Ligation benötigt wird.

Die Gesamtkonzentration von Vektor + Insert sollte zwischen 1-10 µg/ml liegen, um eine effiziente Liga . Vector:Insert-Molverhältnisse zwischen 1:1 und 1:10 werden empfohlen (1:3 ist typisch). Wenn Sie sich nicht sicher sind DNA Konzentrationen, führen Sie mehrere Ligationen mit unterschiedlichen Verhältnissen durch.

Wie lange kann man eine Ligationsreaktion speichern?

Ligaturen können bei Raumtemperatur oder kühler (denken Sie an 12-16°C) über Nacht oder sogar für ein paar Tage erfolgen, wenn du bin wirklich beschäftigt. Du kannst Auch eine Ligatur speichern in den Kühlschrank und nehmen Sie es später heraus, um bei Raumtemperatur für as. weiter zu ligieren lang wie nötig.

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