Video: Gibt es andere Methoden zur Reinigung von PCR-Produkten?
2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2023-12-15 23:32
Für Anwendungen, die PCR Bereinigung oder Validierung von PCR Ergebnisse, dort sind zwei Methoden allgemein befolgt: PCR-Produkt Isolierung mit einer Säule und Gel Reinigung aus einem Agarosegel.
Welche Art von Chromatographie wird hier zur Reinigung von PCR-Produkten verwendet?
Zur Reinigung der PCR-Produkte wird Größenausschlusschromatographie verwendet. Dies fängt kleine Moleküle wie Protein, Grundierungen und Nukleotiden, während große Moleküle wie PCR-Produkte zu groß sind, um in die Beads einzutreten und durch die Säule in die Sammelröhrchen zu gelangen.
Und wie reinigt man DNA? Grundsätzlich kannst du reinigen Ihre DNA indem Sie Ihre Zell- und/oder Gewebeproben mit dem am besten geeigneten Verfahren (mechanischer Aufschluss, chemische Behandlung oder enzymatischer Verdau) lysieren, die Nukleinsäuren von ihren Verunreinigungen isolieren und in einer geeigneten Pufferlösung ausfällen.
Warum reinigen wir außerdem das PCR-Produkt?
Reinigung der DNA von a PCR Die Reaktion ist typischerweise für die nachgeschaltete Verwendung erforderlich und erleichtert die Entfernung von Enzymen, Nukleotiden, Primern und Pufferkomponenten. Üblicherweise verwendete Verfahren verwenden Spin-Säulen, die eine Silica-Matrix enthalten, an die DNA in Gegenwart von chaotropen Salzen selektiv gebunden werden kann.
Warum muss die DNA gereinigt werden?
Wir sauber hoch DNA aus wässrigen Lösungen, um Puffersalze, Enzyme oder andere Substanzen zu entfernen, die nachgeschaltete Anwendungen beeinträchtigen könnten. Beispiele sind PCR-Reaktion sauber hoch, sauber nach Restriktionsverdauungen und sauber aus genomischem oder Plasmid DNA mit zellulären Proteinen/Ablagerungen kontaminiert.
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