Video: Wie wird die DNA-Konzentration mit einem Spektralfotometer berechnet?
2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2023-12-15 23:32
DNA-Konzentration ist geschätzt von Messung der Extinktion bei 260 nm, Anpassung des A260 Trübungsmessung ( Gemessen mit Absorption bei 320 nm), Multiplikation von der Verdünnungsfaktor und mit die Beziehung, die ein A260 von 1,0 = 50 µg/ml reine dsDNA.
Die Leute fragen auch, wie findet man die Konzentration und Reinheit der DNA?
Zu bewerten DNA-Reinheit , Extinktion von 230 nm bis 320 nm messen, um andere mögliche Verunreinigungen zu erkennen. Das Üblichste Reinheitsberechnung ist das Verhältnis der Extinktion bei 260 nm geteilt durch die Ablesung bei 280 nm. Gute Qualität DNA wird ein A haben260/EIN280 Verhältnis von 1,7–2,0.
Was ist eine gute DNA-Konzentration? EIN gut Qualität DNA Probe sollte ein A haben260/EIN280 Verhältnis von 1,7-2,0 und einem A260/EIN230 Verhältnis von mehr als 1,5, aber da die Empfindlichkeit der verschiedenen Techniken gegenüber diesen Verunreinigungen variiert, sollten diese Werte nur als Anhaltspunkt für die Reinheit Ihrer Probe dienen.
Wie berechnet NanoDrop diesbezüglich die DNA-Konzentration?
Sie multiplizieren den Extinktionswert bei 260 nm mit einem festen Faktor (es ist 50 für DNA ) und du bekommst die DNA-Konzentration . Voilá. (Ok, es ist technisch gesehen der A260 einer 10 mm dicken Probe, der mit 50 multipliziert wird; die NanoDrop drückt A260 aus, als ob die Probe 10 mm dick wäre, wie in einer Standardküvette).
Warum mussten wir ein Spektralfotometer verwenden, um unsere DNA zu quantifizieren?
EIN Spektralfotometer ist in der Lage, die durchschnittlichen Konzentrationen der Nukleinsäuren zu bestimmen DNA oder RNA, die in einer Mischung vorhanden ist, sowie deren Reinheit. Verwenden von das Bier-Lambert-Gesetz it ist Es ist möglich, die absorbierte Lichtmenge mit der Konzentration des absorbierenden Moleküls in Beziehung zu setzen.
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