Was ist der Zweck der PCR-Produktaufreinigung?
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Video: Was ist der Zweck der PCR-Produktaufreinigung?

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Video: Die PCR-Methode 2024, November
Anonim

Reinigung der DNA von a PCR Die Reaktion ist typischerweise für die nachgeschaltete Verwendung erforderlich und erleichtert die Entfernung von Enzymen, Nukleotiden, Primern und Pufferkomponenten. Herkömmlicherweise wurde dies unter Verwendung organischer Extraktionsverfahren, wie der Phenol-Chloroform-Extraktion, gefolgt von einer Ethanolfällung erreicht.

Die Frage ist auch, warum es notwendig ist, PCR-Produkte zu reinigen?

Du musst Reinigung von PCR-Produkten um ungenutzte Primer, Nukleotide und Enzyme loszuwerden, um den Ligationserfolg zu optimieren, wodurch die Produkt von PCR . Zu reinigen das PCR-Produkte , wird Größenausschlusschromatographie verwendet.

Was soll ich außerdem nach der PCR tun? Um die Rückgewinnung zu maximieren, spülen Sie den Retentatbecher zweimal mit 10 bis 20 µl TE oder Wasser. Der endgültige PCR Reaktion kann bis zu einem Mikrogramm amplifizierter DNA enthalten, die für eine Vielzahl von molekularbiologischen Anwendungen verwendet werden kann. Diese Anwendungen können mehr oder weniger empfindlich auf die Restbestandteile des PCR Reaktionsmischung.

Man kann sich auch fragen, wie reinigt man PCR-Produkte?

Klassische Methoden verwendet, um sauber hoch PCR-Produkte vor der Sequenzierung umfassen Gelelektrophorese, Ethanolfällung und Säulenchromatographie. Diese Methoden sind zwar sehr effektiv, können jedoch bei der parallelen Verarbeitung mehrerer Proben schnell umständlich werden und weisen einen unterschiedlichen Probenverlust auf.

Warum muss die DNA gereinigt werden?

Wir sauber hoch DNA aus wässrigen Lösungen, um Puffersalze, Enzyme oder andere Substanzen zu entfernen, die nachgeschaltete Anwendungen beeinträchtigen könnten. Beispiele sind PCR-Reaktion sauber hoch, sauber nach Restriktionsverdauungen und sauber aus genomischem oder Plasmid DNA mit zellulären Proteinen/Ablagerungen kontaminiert.

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